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    費氏弧菌發(fā)光桿菌的培養(yǎng)技術(shù)

    點擊次數(shù):2258  更新時間:2017-05-25

    1、費氏弧菌發(fā)光桿菌培養(yǎng)基的配制

    1)、Camp-BAP固體培養(yǎng)基的配制:
    稱取8.92g培養(yǎng)基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。
    2)、Skirrow固體培養(yǎng)基的配制:
    稱取8.5g培養(yǎng)基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。
    FBP原液配置:
    分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵,溶于20ml蒸餾水中,濾膜過濾除菌,放置4°C冰箱可保存一周。
    3)、布氏肉湯增菌液的配制:
    稱取28.1g布氏肉湯粉末,溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌,冷卻后備用。

    2、增菌培養(yǎng)

    費氏弧菌發(fā)光桿菌將新鮮食品,如雞肉,減碎,取5g置于50ml離心管中,加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品,擰緊離心管,先在37°C下預增菌4小時,在加入100 ul頭孢哌酮(30mg/ml),并顛倒混勻,放置在微需氧培養(yǎng)箱中42°C培養(yǎng)48小時。

    3、分離純化

    用接種環(huán)沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上,在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發(fā)亮的菌落在Camp-BAP平板上純化,挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。

    4、菌株培養(yǎng)

    將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上,放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時,觀察細菌生長狀態(tài)。微需氧條件的創(chuàng)造可用微需氧產(chǎn)氣袋和密閉培養(yǎng)罐,也可以用微需氧培養(yǎng)箱(三氣培養(yǎng)箱)培養(yǎng)。

    5、菌株保存方法

    挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養(yǎng)基上平板劃線,放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時,用滅菌棉簽從平板上刮下長出的菌落,懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中,置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差,存放一周后細菌復蘇率即顯著下降。此外,費氏弧菌發(fā)光桿菌保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。

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