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    青海發(fā)光桿菌中蛋白質(zhì)的提取實(shí)驗(yàn)步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):840  更新時(shí)間:2018-05-08

    青海發(fā)光桿菌中蛋白質(zhì)的提取實(shí)驗(yàn)步驟

    一、實(shí)驗(yàn)試劑
    采用T7 Tag Affinity Purification Kit
    T7 Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液:4.29 mM Na2HPO4,1.47 mM KH2PO4,2.7 mM KCl, 0.137 mM NaCl,1%吐溫-20,pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1 M檸檬酸,pH2.2 中和緩沖液:2 M Tris,pH10.4。 PEG 20 000。

    二、實(shí)驗(yàn)步驟
    1. 100 ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,離心5 000 g×5 min,棄上清,收獲菌體,用10 ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸。
    2. 重懸液于冰上超聲處理,直至樣品不再粘稠,4℃離心 14 000 g×30 min,取上清液,0.45 μm膜抽濾后作為樣品液。
    3. 將結(jié)合T7 Tag抗體的瓊脂充分懸起,平衡至室溫,裝入層析柱中。
    4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
    5. 10 ml B/W緩沖液過柱,洗去未結(jié)合蛋白。
    6. 用5 ml洗脫緩沖液過柱,每次1 ml,洗脫液用含150 μl中和緩沖液的離心管收集,混勻后置于冰上,直接SDS-PAGE分析。
    7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中,雙蒸水透析24 h,中間換液數(shù)次。
    8. 用PEG 20000濃縮蛋白。

    三、注意事項(xiàng)
    青海發(fā)光桿菌蛋白在過層析柱前,要0.45 μm膜抽濾,否則幾次純化后,柱子中會有不溶物。

    100667-200401 含量測定 50mg 依托度酸

    100668-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸拓?fù)涮婵?/p>

    100670-200401 含量測定 100mg 扎來普隆 

    100672-200401 HPLC法含量測定 100mg 齊多夫定

    100673-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸羅格列酮

    100674-200301 含量測定 100mg 格列美脲 

    100675-200301 檢查用 50mg 格列美脲雜質(zhì)2

    100677-200401 含量測定 100mg 苯溴馬隆

    100679-200401 HPLC法含量測定 50mg 美洛昔康
    青海發(fā)光桿菌

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