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    侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒組成及試劑配

    點(diǎn)擊次數(shù):917  更新時間:2020-05-19

    侵入性絲囊霉菌PCR檢測試劑盒組成及試劑配制:

    1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

    2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

    3、 樣品稀釋液:1×20ml。

    4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

    5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

    PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

    ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

    ②堿基配對原則;

    ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

    ④靶基因的特異性與保守性。

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