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    波氏桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)反應(yīng)五要素

    點(diǎn)擊次數(shù):943  更新時(shí)間:2021-03-03

    波氏桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)反應(yīng)五要素:

    參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
    引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
    ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
    ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
    ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
    ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
    ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
    ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
    ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
    引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

    綿羊白介素2(IL-2)elisa試劑盒
    綿羊主要組織相容性復(fù)合體(MHC)elisa試劑盒
    綿羊白介素6(IL-6)elisa試劑盒 
    綿羊白介素1β(IL-1β)elisa試劑盒
    綿羊白介素1(IL-1)elisa試劑盒
    綿羊補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)elisa試劑盒
    綿羊白介素2受體(IL-2R)elisa試劑盒
    猴白介素4(IL-4)elisa試劑盒
    猴白介素2(IL-2)elisa試劑盒
    猴Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa試劑盒 
    猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)elisa試劑盒
    猴透明質(zhì)酸(HA)elisa試劑盒 
    猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa試劑盒
    猴B病毒(BV)elisa試劑盒
    猴載脂蛋白B100(apo-B100)elisa試劑盒 
    猴載脂蛋白A1(apo-A1)elisa試劑盒 
    猴白介素6(IL-6)elisa試劑盒
    猴γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒
    猴胰島素(INS)elisa試劑盒 

     

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