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    大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞?操作要點(diǎn)

    點(diǎn)擊次數(shù):721  更新時(shí)間:2022-06-16

    大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞操作要點(diǎn):

    1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

    2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

    3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

    4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。

    5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

    6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

    磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體

    磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體

    磷酸化原癌基因c-Jun抗體

    蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK2抗體

    JWA蛋白抗體

    連接蛋白JPH3抗體

    連接粘附分子C抗體

    蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體

    組蛋白去甲基化酶JMJ2A抗體

    組蛋白去甲基化酶JMJD5抗體

    磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體

    JNK相互作用蛋白4抗體

    氨基末端激酶1/2抗體

    氨基末端激酶1/2/3抗體

    氨基末端激酶1/3抗體

    連接蛋白JPH4抗體


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