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    種子蛋白質(zhì)系統(tǒng)分析的實(shí)驗(yàn)步驟

    點(diǎn)擊次數(shù):1082  更新時(shí)間:2015-06-29

    儀器 、試劑和材料 
    1. 儀器 
    ( 1)日本MRK 公司產(chǎn)VS - KT-P 自動(dòng)定氮儀 
    ( 2)樣品磨 
    ( 3)玻璃層析柱 
    2. 試劑 
    ( 1 ) 50%異丙醇(V / V)或70%乙醇 
    ( 2 ) 3%硼酸 
    ( 3 )0.5mol / L NaCI 
    ( 4 )0.l mol / L NaOH 

    操作步驟 
    1.制樣 
    谷物籽粒風(fēng)干,用樣品磨粉碎,放干燥器中備用。 
    2.裝柱 
    在玻璃層析柱底部過(guò)濾篩板上置一層濾紙。稱取酸洗并經(jīng)540℃ 高溫處理的石英砂 60g,樣品2g 裝入三角瓶中混勻,每個(gè)樣品重復(fù)3 次,設(shè)空白對(duì)照。另稱取石英砂20g,其中10g 置于層析柱底部,將三角瓶中混合物裝入柱內(nèi),再將剩余的10g 石英砂加入層析柱上部。裝好后用小木棒輕輕敲打把空氣排出。 
    3.提取 
    在提取前加20rnl 蒸餾 水,排出柱內(nèi)氣體,浸濕樣品,然后按下列步驟進(jìn)行。 
    ( 1)加100ml 蒸餾 水調(diào)節(jié)流速為0.5ml / min,提取清蛋白,定容于100ml 容量瓶中。 
    ( 2)加100ml0.5mol / L NaCI 提取球蛋白,定容于100 ml 容量瓶中。 
    ( 3)加100ml 70%乙醇提取醇溶蛋白,定容于100ml 容量瓶中。 
    ( 4)加100ml0.1 mol / L NaOH 提取谷蛋白,定容于100ml 容量瓶中。 
    4.提取液中蛋白質(zhì)含量測(cè)定 
    ( 1)從每一容量瓶中吸取10ml 提取液放入消化管中(搖勻后再吸)。然后加3ml 濃濃硫酸,2.5g 催化劑。用150℃ 加熱0.5h 蒸干溶劑,然后用200℃消化0.5h , 400℃ 消 
    化0.5h。 
    ( 2)消化管自然冷卻后,即可用自動(dòng)定氮儀進(jìn)行含氮量測(cè)定。 
    5.樣品 總蛋白 質(zhì)含量測(cè)定 
    每一樣品稱取0.2g ,重復(fù)3 次,然后按本實(shí)驗(yàn)I 方法用自動(dòng)定氮儀測(cè)定含氮量。 

    結(jié)果處理 
    ( l)計(jì)算樣品中蛋白質(zhì)含量。 
    ( 2)計(jì)算各蛋白組分在樣品中的含量及占 總蛋白 質(zhì)的比率。

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