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    制備膠體金的白磷還原法

    點擊次數(shù):1326  更新時間:2015-08-12

        膠體金可用多種方法制備,其中應用較為廣泛的是化學還原法。這一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的還原劑,使金離子還原為金原子,可用于制備膠體金的還原劑有50余種,但在生物醫(yī)學領域內(nèi)zui為常用的還原劑是白磷、檸檬酸三鈉以及鞣酸等。ELISA試劑盒

        白磷還原法的建立已有近百年的歷史,由于此法操作較為簡便,制備出來的膠體金顆粒大小較一致,因而應用較為廣泛,現(xiàn)以Faulk和Taylor(1971)的報道為基礎介紹這一方法。

    (1)取1%氯化金1.5mli、0.1mol/LK2CO3 1. 2ml,加入120ml雙蒸水。

    (2)上述溶液充分攪拌混勻3min以上。

    (3)在攪拌條件下將1ml新鮮配制的20%飽和白磷溶液加入上述混合液中,約在5min內(nèi)溶液變?yōu)樽丶t色。

    (4)將上述混合液加熱煮沸,直至變成鮮明的橙紅色為止,一般約需10min。

    橙紅色的出現(xiàn)表明氯化金的還原反應終止,膠體金制備成功。按上述法制備的金顆粒直徑為(5.6土0.9)nm。ELISA試劑盒

        白磷還原法一般只能制備出單一顆粒直徑的膠體金。因此,用于電鏡雙重標記或多重標記時此法顯得有些不足,還需結合其他方法。Henegouwen等(1986)發(fā)展了傳統(tǒng)的白磷還原法,可制備出多種不同直徑的膠體金,取得了良好的效果,具體方法如下。

    (1)取0.5ml新鮮配制的20%飽和白磷溶液,加入到60ml用上述方法制備的膠體金中(5.6nm土0.9nm)充分振搖5rain以上。

    (2)將1%氯化金0.75ml及0.1mol/LK2CO3 0.6ml加到上述溶液內(nèi),振搖數(shù)分鐘溶液變成棕紅色。

    (3)將上液煮沸加熱,直至變成鮮明的紅色,一般需10min。ELISA試劑盒

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