1. 選用原代細(xì)胞生長狀態(tài)好（90-95%），生長數(shù)量大于5×105進行傳代。
2. 吸除原代細(xì)胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶2次。
3. 1ml細(xì)胞消化液加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細(xì)胞消化液覆細(xì)胞培養(yǎng)瓶底。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細(xì)胞的消化狀態(tài)。
請記?。喝缳N壁細(xì)胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，用手指輕輕拍打細(xì)胞培養(yǎng)側(cè)部或底部至大部分貼壁細(xì)胞懸浮，加入細(xì)胞終止液，終止細(xì)胞消化。每種原代細(xì)胞的消化時間是有差異的。
5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細(xì)胞若干次，再吸出細(xì)胞懸浮液，轉(zhuǎn)入15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘。
6. 棄離心管中液體，加入原代細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)，確定細(xì)胞數(shù)量。
細(xì)胞分瓶后，加入適量原代細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時。
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