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    實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用及效果

    點(diǎn)擊次數(shù):540  更新時(shí)間:2023-03-13

    實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用及效果:

    PCR反應(yīng)特點(diǎn)

    () 特異性強(qiáng)

    PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

    ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

    ②堿基配對(duì)原則;

    ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

    ④靶基因的特異性與保守性。

    其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

    (2) 靈敏度高

    PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=0-2g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

    (3) 簡(jiǎn)便、快速

    PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。

    (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

    不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。


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